全基因合成
产品介绍
经典案例一
经典案例二
常见问题

全基因合成简介

在我们的实验工作中,如果采用一般实验手段无法得到目的基因时,可以进行实验室人工合成。公司拥有成熟的基因合成技术,可根据客户要求,以具竞争力的价格和 快捷的交货周期提供全基因合成服务及相关服务。合成的基因可以根据客户的需求连接到不同的载体上,最终提供的产品包括合成报告、测序报告、质粒酶切图谱、 冻干质粒以及含有该质粒的菌株。 

 一、应用领域:

1.基因突变 / 重组 / 高效表达

2.其他方法难以获得的 cDNA

3.合成不同的基因变异或新基因

4.用于微芯片的大量 cDNA 

二、服务特色: 

1. 免费提供基因的参考设计方案,包括设计酶切位点,密码子优化等

2. 基因合成周期短,严格按照与用户签定的基因合成服务协议和保密合同执行

3. 能合成长度达 10 kb 的基因

4. 基因克隆到用户指定或提供的表达载体上

5. 质量可靠,提供 DNA 测序结果,保证所合成的基因序列 100% 准确

三、服务流程: 

    收到客户提供序列后,确定使用何种酶切位点克隆,克隆到何种载体等等,然后对全序列进行编辑,传至客户确认

    经分析确认达成一致意见后,签订基因合成服务协议与保密合同。基因合成服务协议签定后,客户需预付 50% 的合成费用,本公司方开始合成。交货期也从即日开始

    设计Oligo合成方案,在全自动合成仪器上进行单链的化学合成

    通过OVER-LAPPCR,把单链Oligo拼接成双链的全长基因

    PCR产物酶切、纯化,连接到质粒中,将质粒转入细胞株培养

    提取阳性克隆进行DNA测序,确认插入片段的准确性

    对可能存在的错误位点用定点突变的方法加以改正,再经测序验证

    提供实验报告,包括装载目的基因的质粒、细菌株、测序图谱/序列

    合成完毕后,本公司通知客户,收到全部货款,本公司开始发货 

四、情况说明 

    1、由于基因结构的复杂性,并不是所有的片段都能顺利合成。对于较长的片段或一些复杂结构如重复序列、高 GC 片段等,可能会需要额外的时间调整合成方案。如果发生这种情况,技术人员会及时与您联系,告知您合成进程。

 

    2、所合成的基因一般克隆于通用载体中,如需克隆在客户指定的载体中,我公司会酌情再收取一定的费用,并且交货时间会适当延长。

五、密码子优化:

  对于密码子优化服务,在提供需要优化和合成的基因序列的同时,我们还需要如下讯息:

1. 需要合成的蛋白或 DNA 序列

2. 宿主表达系统

3. 两端的限制性酶切位点

4. 优化后的序列中需要避免的限制性酶切位点

5. 优化后的序列中需要保留的限制性酶切位点 

六、合成完成后向客户提供的技术资料与产品 

1、不少于2ug的含目的基因的通用载体质粒一份

2、含上述质粒的大肠杆菌菌株一份

3、基因序列100%正确的原始报告测序正本一份

4、基因合成报告一份 

七:全基因合成服务要求 

1.  请将您需要合成的基因全序列以 E-mail 或传真的形式告知公司的业务员或公司的技术员。

2.  请说明实验的具体要求,如:使用何种酶切位点进行克隆以及需克隆于何种载体等。

3. 测序结果如果发现有错误位点,我们会采取相应的技术手段进行修复校对,保证整个序列的正确性。

4. 提供实验结果:包括实验操作规程、测序结果、测序彩色峰图、含有合成基因的质粒及含该质粒的菌体( 穿刺菌 )等。

定点突变

通过实验方法可以有效地向目的基因片段中引入任何所需的 DNA 变异,包括碱基添加、删除、点突变等。

(一)服务要求


1. 请您通过业务员或技术员提供需要进行突变基因的全部详细序列;突变前序列请标注为: Wild sequence ;突变后序列请标注为: Mut sequence 。
2. 请提供突变基因克隆操作的详细背景资料,例如使用何种限制酶酶切位点、克隆于何种载体等。
3. 请说明实验的具体要求,详细情况请参考如下:

客户常问的几个问题:

1.如果想在贵公司做与基因工程相关的技术服务,该如何联系?


可以直接通过业务员或公司的技术部联系;同时提供详细的背景资料、实验要求等。技术人员经过研讨后将与您联系,共同制定实验方案,并告知您具体的服务价格和完成时间;我们将在收到您同意实验的文字资料与实验材料后立即开始实验。

2.贵公司对我们提供的实验材料有何具体要求?


(1) 对实验材料中涉及病原体等危险的材料拒绝接受。
(2) 在实验材料中涉及到的碱基序列必须以电子版的形式提供.
(3)实验中使用的载体等要尽量提供详细的背景资料(如质粒大小、抗性、拷贝数、多克隆位点等 ) ;如 果为商品化载体,请提供生产厂家及标准名称;如果所提供载体是您自己构建的,请注明大体结构情况。
(4)实验中如果使用氨苄青霉素、氯霉素、链霉素、卡那霉素以外的抗生素时,抗生素需您自己提供。
(5)您自己提供的引物如果为干品,请标明具体的 OD 数;如果为液体状态,请标明具体浓度。
(6) 可用甘油菌和穿刺菌的形式邮寄菌体(最好同时提供相应质粒 ) ;如果提供质粒,则质粒的量最好在 4 mg以上;如果提供的是 PCR 产物,则 PCR 产物量最好在 5 mg 以上(最好附有电泳照片 )。
(7) 用于提取 RNA/DNA 的材料要新鲜,采样时液氮中速冻后保存于 -80 ℃ 冰箱中,并使用液氮或干冰运输。
(8) RNA 样品最好用干冰运输,如果确实没有条件,可将 RNA 沉淀,在含有沉淀的离心管中加入 100% 乙醇,用冰袋运输。

3.贵公司能免费提供哪些载体和引物?


公司免费提供测序及 PCR 扩增用的通用引物: Bca BEST Primer M13(-47) 、 Bca BEST Primer RV-M 、 T3 Promoter 、 T7 Promoter 、 AOX 3" 、 AOX 5" 、 pGEX 3" 、 pGEX 5" 以及 SP6 Promoter 等。

4. 基因工程操作服务通常耗时较长,如果想了解实验进展情况该怎么办?


公司在每周五以 E-mail 的形式将实验进展的大体情况通知客户;您也可以向业务员查询;也可以直接与技术人员交流沟通。

(二)操作程序


1. 具体联系方式请参考“ 客户常问的几个问题 ”。
2. 如您提供的模板序列为非公司的测序结果,我们将首先对模板进行测序并将与您沟通测序结果。
3. 根据突变方案设计合成突变引物,进行基因突变实验的 PCR 反应,克隆变异体。
4. 进行 DNA 测序验证突变序列的正确性。
5. 提供实验结果,包括实验操作规程、突变用引物、质粒变异体以及含有该质粒的菌种(穿刺菌)、测序结果、测序彩色峰图等。
6. 1 kbp 以下的 DNA 片段克隆在普通载体上的单点突变的时间约需 10 天左右。

(三)收费标准

突变点1个2个3个3个以上
<1000bp¥1500¥2500¥3500询价
1000-2000bp¥2000¥3500¥4500询价
时间20个工作日25个工作日30个工作日协商