DNA克隆
产品介绍
经典案例一
经典案例二
常见问题

一.DNA克隆简介

DNA克隆是基因工程研究中最基本的操作之一。简单地讲,就是将外源基因与克隆载体进行体外连接,然后再转化到宿主菌中进行克隆、筛选,以此获得质粒重组体。 

 

二.服务要求

1. 提供外源DNA的来源及背景资料。DNA来源包括:PCR扩增产物,RT-PCR扩增产物,从其他质粒上酶切得到的DNA片段等。 

2. 如DNA为PCR产物,请提供DNA片段的电泳照片,并请标明Marker及其浓度。  

3. 注明克隆使用的酶切位点。 

4. 如果为商品化载体,请提供生产厂家及标准名称,如果所提供载体是您构建的,请注明多克隆位点、抗性、分子量等资料。 

5. 实验中使用氨苄、青霉素、卡那霉素、四环素以外的抗生素时,抗生素需您提供。 

6. 您自己提供的引物如果为干品,请标明具体的OD数,如果为液体状态,请标明具体浓度。 

7. 可用甘油菌和穿刺菌的形式邮寄菌体(最好同时提供相应质粒),如果提供质粒则质粒的量最好在4μg以上;如果提供的是PCR产物,则PCR产物量最好在5μg以上(最好附有电泳照片)。

 

三.操作程序

1. 通过代理商或直接和公司联系,同时提供详细的背景资料,实验要求等。代理商或公司经过研讨后将和您取得联系,协商确定实验方案,并告知您具体的服务价格,我们将签订合同,在收到您试验材料后,立即开始实验。 

2. 如果您需要我们进行PCR扩增时,我们会采用高保真DNA聚合酶进行PCR反应,但不承诺测序结果与参考序列完全一致。

3. 如果克隆后的质粒需要测序反应,请将标准参考序列的电子版资料提供给我们。 

4. 在完成DNA克隆和测序等工作后,我们将为您提供一套完整的实验结果,其中包括:实验操作说明、引物、克隆构建的质粒及含该质粒的菌体(穿刺菌)、测序结果碱基序列图和测序彩色峰形图。 

5. 一般情况下普通载体的克隆需10天左右时间。

 

四.收费标准

1. 普通载体(如pUC系列、pBluescript ll系列、T载体系列、pGEM系列等)与其他特殊载体(如pET系列、pGEX系列、pLNCX 系列、pQE系列、pBR系列等)在克隆时难易程度相差很大,不同的DNA片段的克隆情况也各不相同,因此DNA片段的克隆服务收费标准不一样。一般来说,单就克隆操作这一步骤而言的收费标准在600~1500之间,具体情况请询价。  

2. 多表达框、多拷贝数质粒构建过程相对复杂,具体收费标准请与公司基因工程师直接谈。

 

五.克隆服务的种类

1、PCR产物的TA克隆。 

2、PCR产物克隆到非T载体。

3、注明克隆使用的酶切位点以及是否需要平端连接等。

4、各种载体中元件的修改。

5、原核、真核表达载体的构建。